Ensaio ABTS
Este é um método analítico que utiliza uma medida espectrofotométrica para determinar a capacidade antioxidante de uma amostra. Um espectrofotômetro UV-Vis é usado para medir a absorbância de uma solução contendo o radical ABTS • +, gerado pela oxidação do ABST (2, 2'-azinobis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonato), uma substância incolor que na forma A radicalica é colorida pela absorção de comprimentos de onda característicos na faixa visível. A adição de moléculas antioxidantes à solução ABTS • +, que pode atuar tanto através da transferência de hidrogênio quanto de elétrons, determina a redução do radical para a forma incolor; com descoloração consequente da mistura de reação.Esta descoloração, proporcional à quantidade de antioxidante presente, pode ser medida como uma diminuição na absorvância em um determinado tempo a um comprimento de onda específico (734 nm) .O poder antioxidante é expresso por comparação com os valores de absorbância medidos para quantidades conhecidas de uma molécula antioxidante escolhida como o padrão de referência, que é geralmente ácido ascórbico ou Trolox (neste caso Fala-se da atividade antioxidante TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity).
A medição do poder antioxidante baseada no uso do ABTS tem a vantagem de ser simples e rápida. Além disso, permite a medição de antioxidantes hidrofílicos e lipofílicos em uma ampla faixa de pH. No entanto, deve-se ter em mente que o radical usado (ABTS +) não é fisiológico e não está presente em sistemas biológicos e que os problemas de repetibilidade de medição devido à cinética de reação dos diferentes antioxidantes envolvidos são frequentemente destacados.
FRAP (Potência Antioxidante Redutora de Férrico)
O teste FRAP mede a capacidade de redução de antioxidantes contra íons de ferro. É um método baseado na transferência de elétrons, em que os íons de ferro passam de Fe3 + para Fe2 +. Sob certas condições de pH (3, 6) e na presença de TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazina), esses íons formam complexos com características diferentes, em particular o derivado reduzido (Fe2 + -TPTZ) assume uma cor azul que tem uma absorção máxima a 593 nm que pode ser medida espectrofotometricamente. A capacidade redutora de uma substância antioxidante pode, portanto, ser medida como uma variação na absorbância da solução contendo o oxidante no comprimento de onda estabelecido para comparação com a variação relativa a um padrão (por exemplo, ácido ascórbico).
O teste FRAP foi projetado para medir o poder redutor do plasma, mas foi então adaptado para testar a capacidade antioxidante de compostos puros e matrizes complexas. De fato, como este método permite avaliar apenas a capacidade redutora através da transferência de elétrons, ignorando completamente a ação de antioxidantes que atuam através da transferência de hidrogênio, não permite mensurar a contribuição de moléculas como tióis e proteínas, que desempenham um papel antioxidante. fundamental em fluidos biológicos (por exemplo, sangue). A vantagem em usar este método é que é um dos métodos mais simples, mais rápidos e menos dispendiosos para determinar a capacidade antioxidante in vitro.
TESTE DPPH
O 2, 2-difenil-1-picrilidrazil (DPPH •) é um radical nitrogênio muito estável e comercialmente disponível, caracterizado por uma intensa cor vermelho-púrpura, que descolora quando é reduzido na presença de uma molécula com capacidade antioxidante. Mediante a medição espectrofotométrica a 517 nm da variação de absorbância da solução de DPPH após reação com um composto antioxidante, é possível quantificar a capacidade redutora da substância de teste, quer ela atue por transferência de hidrogênio ou por transferência de elétrons. O resultado é geralmente expresso como IC50, isto é, a quantidade de antioxidante capaz de reduzir em 50% a concentração inicial de DPPH.
É um método rápido, simples e econômico. Os limites dessa técnica analítica são dados pela possibilidade de que os resultados da análise sejam falseados no caso em que as moléculas de teste absorvem na mesma faixa de comprimento de onda que o radical DPPH ou na presença de grandes moléculas sobrecarregadas estereoquimicamente que não eles reagem com a parte reativa da raiz. Isso determina que o DPPH reaja com antioxidantes até 1000 vezes mais lentamente que os radicais peroxil.
TESTE DE PCL (fotohemiluminescência)
O teste de PCL é baseado na reação de uma espécie radical específica, o ânion superóxido (O2 • -), gerado fotoquimicamente por radiação UV, com um composto capaz de emitir quimiluminescência. O marcador utilizado é o luminol, uma molécula que quando oxidada por radicais livres emite uma luz que pode ser medida usando um instrumento especial (Photochem®). A presença de antioxidantes na mistura de ração desativa as espécies de radicais inibindo a emissão de quimiluminescência. A análise de PCL é muito rápida e sensível. Além disso, com a aplicação de dois diferentes protocolos analíticos, denominados ACW (Antioxidant Capacity Water soluble) e ACL (Antioxidant Capacity Lipid Soluble), as contribuições para a capacidade antioxidante total do componente solúvel em água (flavonóides, vitamina) podem ser medidas para o mesmo composto. C, aminoácidos, etc.) o lipossolúvel (tocoferóis, tocotrienóis, carotenóides, etc.). Para comparação dos valores registados com as medições relativas às moléculas de referência padrão, ácido ascórbico para o protocolo ACL e Trolox para o protocolo ACW, obtém-se a capacidade antioxidante do produto teste.
