generalidade
A imunofixação é um teste de laboratório que permite a identificação e tipagem de gamaglobulinas presentes em uma amostra biológica.
Em detalhes, a análise permite estudar - no sangue ou na urina do paciente - as classes de imunoglobulinas (IgA, IgG, IgM, IgE ou IgD) e o tipo de cadeia leve kappa ou lambda, de acordo com sua mobilidade eletroforética específica. . Posteriormente, para a identificação de qual gamaglobulina está envolvida, a imunofixação envolve a inoculação de antígenos específicos para o fragmento ou o anticorpo correspondente ( anti-soros anti-imunoglobulinas ): a presença da suspeita de alteração é confirmada pela formação de um precipitado, visível a olho nu ou sob um microscópio.
Esta informação é de grande importância para estabelecer, em particular, o diagnóstico de doenças plasmocitárias (gamopatias ou discrasias plasmocitárias). A imunofixação é muito útil para a avaliação e monitoramento de mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenström e amiloidose primária (também chamada de amiloidose de cadeia leve).
o que
A imunofixação (ou imunoeletroforese, também abreviada para o acrônimo IFE ) é uma técnica que pode determinar se e qual classe de imunoglobulinas (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) ou tipo de cadeia leve kappa ou lambda, está presente em excesso ou defeito no soro sangüíneo e na urina do paciente.
As cadeias leves kappa e lambda caracterizam o componente monoclonal, isto é, os anticorpos com a mesma estrutura química.
Imunofixação Sierica e Urinaria: quando é indicado?
As discrasias ou gamopatias plasmocelulares são um grupo heterogêneo de distúrbios, de etiologia desconhecida, caracterizado por:
- A proliferação de um clone de células B é desproporcional ;
- Presença no soro e / ou na urina de um tipo de imunoglobulina (ou de sua subunidade polipeptídica), estrutural e eletroforeticamente homogênea ( monoclonal ).
Normalmente, as discrasias das células plasmáticas são diagnosticadas por eletroforese de proteínas séricas e urinárias, seguida de imunofixação sérica (IFE).
Ao mesmo tempo, um exame de sangue pode ser prescrito para medir a concentração total de imunoglobulina (IgG + IgM + IgA).
Para saber mais: Imunoglobulinas - o que são, como medem e os valores de referência »Imunofixação: princípio básico
A imunofixação é um exame de duas fases (primeiro a eletroforese em gel de agarose, depois a imunoprecipitação com anti-soros específicos ).
O primeiro passo da imunofixação é o mesmo que o da ELETROFORESE de proteínas (ou protidogramma), portanto é necessário lembrar algum conceito:
- A eletroforese é uma análise laboratorial que permite determinar a quantidade de proteínas presentes no soro sanguíneo ou em outras amostras biológicas e, para cada fração, revela se há alguma anomalia em termos de qualidade. Em particular, este teste permite separar as proteínas em cinco grupos: albumina, alfa 1 globulinas, alfa 2 globulinas, beta globulinas e gama globulinas ; os últimos são investigados mais especificamente com imunofixação.
- A eletroforese é um método de separação baseado na diferente velocidade de migração de partículas eletricamente carregadas, através de uma solução e um meio de suporte inerte, sob a influência de um campo elétrico, gerado por uma corrente contínua. Na prática, o teste explora a carga elétrica e a massa molecular das proteínas presentes na amostra do paciente. Sob o impulso de um campo elétrico, essas macromoléculas migram e "agrupam" por tipo, respondendo ao estresse de maneira característica. O resultado ( padrão eletroforético ) consiste em vários picos e curvas, aos quais correspondem as frações de proteínas. Normalmente, o primeiro pico, mais alto e mais estreito, é o da albumina ; a seguir, os picos das globulinas são observados, muito abaixo da albumina. O aumento ou diminuição da amplitude e intensidade dos picos formados no traço indicam maior ou menor presença das proteínas de cada categoria; quanto mais proteínas estiverem presentes em uma faixa, maior será o respectivo pico. No caso das gamaglobulinas, se você quiser saber a quantidade de cada uma das diferentes classes (IgA, IgM, IgG etc.), você precisará recorrer à dosagem única. Em geral, quanto mais gamaglobulinas estiverem presentes em uma faixa, maior será o respectivo pico; a altura corresponde à quantidade total de proteínas pertencentes a uma determinada categoria.
A IMUNOFISSAZIONE prevê:
1) Eletroforese em gel de agarose : a amostra do paciente (soro ou urina) é depositada em uma tira eletroforética, ou seja, o suporte de migração (geralmente gel de agarose). Através da aplicação de um campo elétrico, gerado por uma corrente contínua, a separação em diferentes bandas é obtida. Na prática, todo tipo de gamaglobulina presente na mistura (que está na amostra do paciente) migra de acordo com a massa molecular e a carga elétrica. A diferente mobilidade eletroforética das gamaglobulinas permite identificá-las (cada uma delas coincide com uma banda específica no trajeto eletroforético) e observar eventuais anomalias.
2) Imunoprecipitao com anti-soros especicos (fixao) : os antigios especicos para um dado anticorpo ou um fragmento (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-luz kappa ou anti-cadeia ) s adicionados individualmente a cada tira electroforica. cadeia leve lambda). Se uma proteína monoclonal estiver presente, a interação do antígeno com o anticorpo correspondente produzirá uma banda estreita (isto significa que o resultado é positivo) e a formação de um precipitado, visível a olho nu ou sob um microscópio. Finalmente, a amostra é processada (isto é, lavada e colorida) para remover as proteínas que não precipitaram, para obter a secagem do gel e prosseguir com a leitura dos resultados.
Porque sim
O que é imunofixação para?
A imunofixação sérica é um teste indicado para diagnosticar ou monitorar doenças caracterizadas por uma alteração da gamaglobulina, especialmente quando se trata da produção do componente monoclonal ( gamopatia monoclonal ).
Para saber mais: Gamopatias Monoclonais - O que e o que são »A imunofixação é útil em casos de suspeita de discrasia plasmocelular e é essencial para o estudo de MIELOMA (e doenças relacionadas) e MGUS (acrônimo de "gammapatie monoclonal de significado incerto").
Este exame também permite avaliar a macroglobulinemia de Waldenström e a amiloidose de cadeia leve ( AL ).
Imunofixação: quando o exame é prescrito?
A indicação para imunofixação é posterior a achados clínicos ou laboratoriais que levantam a suspeita de alterações nos anticorpos monoclonais ou imunoglobulinas no soro ou na urina.
Por exemplo, este teste permite aprofundar o resultado da eletroforese seropro ou urinária: quando no trajeto eletroforético, as bandas que correspondem às gamaglobulinas se desviam da normalidade, a imunofixação identifica qual destas proteínas é alterada, em termos de quantidade e qualidade.
Em resumo, a imunofixação sérica pode ser prescrita:
- No caso de outros testes de laboratório fornecerem um resultado anormal, em termos de ausência ou quantidades cada vez menores de proteínas plasmáticas do que o normal;
- Quando suspeitamos da presença de doenças caracterizadas pela produção de um componente monoclonal, tais como:
- Mieloma múltiplo e suas variantes;
- Macroglobulinemia de Waldenström;
- amiloidose;
- Quando o paciente apresenta sintomas e sinais que causam suspeita de gamopatia monoclonal ou mieloma múltiplo, como:
- Dores ósseas;
- anemia;
- Fadiga fácil;
- Infecções recorrentes;
- Fraturas inexplicáveis.
No caso do mieloma múltiplo, a eletroforese de proteínas e a imunofixação também são muito úteis para monitorar o progresso da doença (acompanhamento).
Imunofixação: em quais amostras podem ser realizadas?
As amostras biológicas que podem ser submetidas a imunofixação são principalmente:
- Soro (imunofixação do soro);
- Urina (imunofixação urinária);
- Licor * (imunofixação de licor).
* Nota : o líquido cefalorraquidiano ou líquido é o fluido que permeia e protege o cérebro, a medula espinhal, os nervos cranianos e as raízes espinhais.
Valores normais
Um resultado NEGATIVO da imunofixação sérica e urinária para gamaglobulinas monoclonais ou policlonais é considerado NORMAL .
Faixa globulina
As gamaglobulinas constituem 9-20% das proteínas plasmáticas totais.
- Valor de referência Gamma globulins : 0.9-1.4 g / dl
Em relação à concentração total de imunoglobulinas ( IgG + IgM + IgA ), acredita-se que valores entre 600 e 2300 mg / dl sejam normais.
- Valor de referência Imunoglobulina no soro :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Nota : o intervalo de referência do exame pode variar ligeiramente dependendo da idade, sexo e instrumentação usada no laboratório de análise. Por esse motivo, é preferível consultar os intervalos relatados diretamente no relatório. Também deve ser lembrado que os resultados das análises devem ser avaliados como um todo pelo clínico geral, que conhece o quadro anamnésico do paciente.
Valores Altos - Causas
O aumento em globulinas gama pode ser:
- Policlonal, se a produção de imunoglobulinas for heterogênea, ou seja, todos os componentes da faixa de globulinas - produzidos ou derivados de diferentes plasmócitos - são afetados pelo aumento;
- Monoclonal, quando as gamaglobulinas são produzidas ou derivadas de um único tipo (clone) de células plasmáticas.
O aumento na faixa de globulina policlonal pode estar associado a:
- Doenças inflamatórias crônicas;
- Artrite reumatóide;
- Lus eritematoso sistico;
- Doenças crônicas do fígado (como hepatite e cirrose);
- Infecções agudas e crônicas;
- Imunizações recentes;
- Algumas doenças cancerosas.
Valores altos de gamaglobulina monoclonal podem indicar, em vez disso, a presença de:
- Algumas neoplasias e inflamações crônicas;
- Mieloma múltiplo;
- linfoma;
- Macroglobulinemia de Waldenström.
Um excesso de gamaglobulina é chamado hipergamaglobulinemia, enquanto uma deficiência é conhecida como hipogamaglobulinemia .
Valores baixos - causas
A redução das gamaglobulinas pode indicar a presença de várias doenças genéticas do sistema imunológico, incluindo a agamaglobulinemia, ou uma imunodeficiência secundária (por exemplo, AIDS, insuficiência renal, sepse aguda e síndrome de Cushing).
A diminuição dos valores da gamaglobulina também pode depender da ingestão de drogas citostáticas, imunossupressores e esteróides.
Como executar
Imunofixação Sierica
A imunofixação do soro envolve um simples desenho de sangue de uma veia do braço. O soro é obtido por centrifugação da amostra biológica; isso permite, de fato, separar a fração contendo as células (parte corpuscular) da parte líquida do sangue (plasma). O soro sanguíneo é livre de fatores de coagulação (fibrinogênio, fator VIII, fator V e protrombina).
Imunofixação urinária
Para realizar a imunofixação urinária, é necessário coletar uma pequena quantidade de urina em um recipiente estéril especial. De acordo com as indicações do médico e do laboratório, a amostra pode ser coletada sem um tempo preciso ( aleatório ) ou dentro de 24 horas .
Imunofixação do licor
A análise requer a remoção de uma pequena quantidade de líquido cefalorraquidiano, inserindo uma agulha, na cavidade espinhal ( punção lombar ).
preparação
Imunofixação: como se preparar para o exame?
- Antes da coleta de sangue, alguns laboratórios podem exigir um jejum de pelo menos 10-12 horas. Durante este período de tempo, é permitido tomar uma pequena quantidade de água.
- A imunofixação pode ser realizada na urina coletada em uma hora específica do dia (aleatória) ou durante as 24 horas, portanto é necessário obter antecipadamente os recipientes estéreis apropriados.
- Quanto à imunofixação do licor, no entanto, nenhuma preparação especial é necessária.
O que pode alterar o resultado do exame?
Alguns medicamentos podem afetar o resultado da imunofixação, por isso é aconselhável informar ao médico qualquer tratamento farmacológico em andamento.
Nos seis meses anteriores ao exame, a administração de vacinas (imunização) e o uso de drogas, como fenitoína, procainamida, contraceptivos orais, metadona e gama-globulinas terapêuticas, podem aumentar a concentração de imunoglobulinas. Outros medicamentos que podem alterar o resultado do teste são corticosteróides, neomicina, ácido acetilsalicílico e clorpromazina.
Interpretação de Resultados
O resultado da imunofixação é avaliado em combinação com o resultado de outras análises. A interpretação da descoberta é do clínico geral ou do especialista de referência que pode identificar e relatar alterações em uma gamaglobulina específica (por exemplo, a banda que coincide com as imunoglobulinas G) para certas doenças. Essa avaliação confirma ou sustenta a hipótese diagnóstica: em geral, a imunofixação pode revelar um perfil de gamaglobulina normal ou identificar uma proteína monoclonal ou um modelo policlonal .
Uma vez que a doença tenha sido definida, a imunofixação pode ser realizada para:
- Monitore a doença ao longo do tempo e siga o curso (acompanhamento);
- Verifique a eficácia do protocolo terapêutico .
Prós e contras da imunofixação
Em comparação com eletroforese de proteínas, imunofixação:
- É mais rápido : os resultados da imunofixação são geralmente obtidos em três horas;
- É mais sensível (embora ligeiramente): a imunofixação pode revelar uma imunoglobulina excluída da eletroforese de proteínas, especialmente em baixas concentrações (menos de 1 grama / litro).
Além disso, imunofixação:
- Pode ser parcialmente automatizado ;
- É facilmente legível e interpretável .
No entanto, a imunofixação é mais dispendiosa do que a eletroforese de proteínas e só permite a análise da gamaglobulina .
Resultado normal
Na imunofixação, um caminho normal inclui:
- Uma banda que coincide com a imunoglobulina G mais escura ( IgG );
- Uma banda correspondente à imunoglobulina A mais leve ( IgA );
- A ausência da banda para imunoglobulina M ( IgM );
- A banda kappa é mais densa que a lambda (cadeia leve), com uma relação de 2: 1.
Em um resultado normal, as bandas são grandes e há uma redução gradual e uniforme na densidade da cor em direção às bordas da tira de imunoeletroforese.
Globulinas gama policlonais
Em alguns casos, todas as bandas da imunofixação são homogeneamente obscurecidas na mesma extensão. Este modelo representa a presença de imunoglobulinas policlonais . Também neste caso, as bandas são grandes e a transição para as bordas da faixa imunoeletroforética é gradual. A banda IgM - normalmente ausente - é larga.
Globulinas gama monoclonais
Quando uma faixa estreita com bordas afiadas pode ser identificada no caminho de imunofixação, isso significa que a busca por componentes monoclonais é positiva .
A identificação de uma imunoglobulina monoclonal é útil no diagnóstico das seguintes condições:
- Gamopatia monoclonal de significado indeterminado (MGUS);
- Mieloma múltiplo;
- Macroglobulinemia de Waldenstrom;
- Amiloidose.
Além disso, a imunofixação pode ser usada para monitorar a terapia nas discrasias plasmocitárias (ou seja, mieloma múltiplo e macroglobulinemia de Waldenström). Se o nível de proteína monoclonal diminui ou não é detectável após a quimioterapia, isso pode indicar uma resposta ao tratamento . Em contraste, uma proteína monoclonal persistente, apesar do tratamento, é um sinal de doença refratária .
Nota Um resultado negativo na imunofixação nem sempre exclui uma discrasia plasmocelular. Por exemplo, um mieloma múltiplo não secretor ou oligossecretor pode dar resultados negativos tanto na urina como no soro. Portanto, se a suspeita diagnóstica de gamopatia ainda é alta, a determinação da relação das cadeias leves Kappa / Lambda Libere ( razão K / L ) é indicada.
Imunofixação e diagnóstico da Esclerose Múltipla
A imunofixação do líquido cefalorraquidiano (LCR) é prescrita quando o médico suspeita da presença de esclerose múltipla . Nesse caso, o traço que é determinado é característico, pois destaca a presença das chamadas bandas oligoclonais . O resultado é reportado no laboratório como positivo . Deve-se considerar que as bandas não são normalmente observadas na imunofixação sérica, pois elas se correlacionam com a produção de gamaglobulinas intratecais .
No entanto, deve-se notar que este achado não necessariamente confirma o diagnóstico, pois outras condições podem se apresentar com bandas oligoclonais no líquido cefalorraquidiano.
Em outras palavras, a identificação das bandas oligoclonais com a imunofixação do líquido é muito útil para apoiar o diagnóstico de esclerose múltipla, mas deve ser confirmada por outras investigações . Outras condições que podem fornecer tais resultados são inflamação do sistema nervoso central, incluindo: encefalite relacionada ao HIV, neurossífilis, neurossarcoidose, meningoencefalite de Lyme, tumores malignos do SNC, neuromielite óptica e mielite transversa.
