A fim de manter um equilíbrio adequado entre os radicais livres e os sistemas antioxidantes, é importante fornecer ao organismo um suprimento adequado de moléculas com propriedades antioxidantes do exterior, para evitar que as defesas naturais contra os radicais, constituídas pela barreira antioxidante, se esgotem. deixando as biomoléculas expostas à agressão de espécies reativas que comprometem sua funcionalidade.
As moléculas antioxidantes, que podem ser tomadas com a dieta através do consumo de alimentos ricos nessas substâncias, ou através de suplementação direcionada, são numerosas e incluem polifenóis, vitaminas, carotenóides e muitas outras substâncias. Estes compostos são capazes de reagir com radicais livres, reduzindo sua reatividade e gerando moléculas menos perigosas facilmente eliminadas do corpo.
Também é importante levar em conta que os antioxidantes agem com diferentes mecanismos e com diferentes eficiências dependendo do tipo de radical envolvido na reação. Cada antioxidante, de fato, é capaz de realizar sua ação de contraste em alguns radicais específicos, por isso é necessário que a contribuição de antioxidantes exógenos seja tão variada quanto possível, para que as diferentes moléculas possam atuar de forma complementar ou em sinergia na proteção de biomoléculas da oxidação por espécies radicais de natureza diferente.
A este respeito, a atenção da pesquisa se concentrou no aprofundamento dos mecanismos com os quais os antioxidantes protegem as células. Em particular, é muito importante medir a quantidade de antioxidantes introduzidos com a dieta ou a eficácia da barreira antioxidante, de modo a poder corrigir quaisquer situações de risco de uma forma direcionada.
A principal dificuldade em medir a eficácia antioxidante de uma substância deve-se ao fato de que as espécies de radicais livres envolvidas na determinação do estresse oxidativo são numerosas e reagem com as biomoléculas com diferentes velocidades e mecanismos. Devido à natureza diferente dos radicais livres, é extremamente difícil identificar um método de análise que permita medir de maneira unívoca a capacidade de um composto para contrabalançar a ação oxidante de espécies reativas, especialmente ao lidar com matrizes complexas como sangue, alimentos ou extratos de plantas. Os radicais livres, na verdade, diferem em reatividade, para o tipo de biomolécula alvo, para a matriz biológica em que atuam e para afinidade físico-química (ambiente lipofílico ou hidrofílico), bem como para o mecanismo com o qual são gerados.
Além disso, a fim de comparar os dados medidos para diferentes substâncias, é importante tentar padronizar os métodos usados tanto quanto possível. Um método analítico ideal deve, em primeiro lugar, ser simples e facilmente reproduzível, a fim de garantir uma boa repetibilidade dos resultados. Além disso, deve utilizar radicais biologicamente significativos, que reajam com mecanismos claros e conhecidos, a fim de simular tanto quanto possível in vitro o que ocorre no organismo, minimizando a interferência. Finalmente, um teste ideal deve ser versátil para permitir a medição de substâncias hidrofílicas e lipofílicas.
Atualmente, não existe um método único válido para medir o poder antioxidante de um composto, que responde às características descritas. Por isso, é necessário recorrer à combinação dos resultados de vários ensaios baseados em mecanismos e diferentes espécies radicais, de modo a chegar a um compromisso, que também leva em conta o uso final dos resultados em si.
Estabeleça o que você quer medir e por que é importante não apenas pela escolha dos métodos de medição mais adequados, mas também pelo uso do protocolo de extração mais adequado, pois os antioxidantes representam uma grande família de compostos com características físico-químicas muito diferentes. e não há técnica extrativa capaz de extrair todos os antioxidantes presentes em uma matriz complexa, minimizando ao mesmo tempo a presença de potenciais interferentes que podem distorcer os resultados.
MÉTODOS ANALÍTICOS
A maneira mais direta de avaliar a capacidade de um composto em proteger células e tecidos do estresse oxidativo é medir a capacidade antioxidante do sangue após tomar o mesmo composto, ou seja, a eficácia do fortalecimento da barreira antioxidante, que inclui todos os substâncias antioxidantes presentes no sangue. Os testes elaborados geralmente têm características muito específicas e são capazes de medir a ação de um determinado tipo de antioxidante em condições bem definidas. No entanto, os diferentes antioxidantes presentes no sangue não atuam separadamente, mas realizam uma ação estritamente interconectada para criar uma sinergia que permita uma ótima proteção contra a agressão pelos radicais livres. Portanto, a verdadeira medida da capacidade antioxidante total não pode ser reduzida à mera soma da capacidade antioxidante dos componentes individuais, e é impossível determinar a ação global dos sistemas antioxidantes em fluidos biológicos por um único ensaio.
Uma forma alternativa é medir in vitro o poder antioxidante das substâncias exógenas que são tomadas com a dieta (alimentos e suplementos). Neste caso, no entanto, deve-se notar que esta é uma medida do potencial antioxidante de um composto, que fornece apenas uma aproximação de sua capacidade de exercer uma ação protetora real nos compartimentos biológicos contra a agressão de radicais livres, uma vez que avalia quantitativamente, os antioxidantes presentes, mas não fornecem qualquer informação sobre sua biodisponibilidade e sua eficácia quando introduzidos no organismo.
Os métodos para medir a capacidade antioxidante podem ser divididos em duas categorias com base no mecanismo pelo qual eles reagem com radicais livres para inativar sua reatividade:
- Métodos HAT (Hydrogen Atom Transfer), baseados na capacidade de uma substância para realizar sua ação antioxidante pela liberação de um átomo de hidrogênio para as espécies radicais;
- Métodos SET (Single Electron Transfer), que avaliam a capacidade de uma substância em reduzir os radicais livres por transferência de elétrons.
Alguns dos métodos analíticos empregados são capazes de atuar com ambos os mecanismos.
Com base no que foi dito até agora, é claro que o número de testes desenvolvidos para a determinação da capacidade antioxidante e anti-radical é muito alto, por isso vamos descrever brevemente os mais difundidos e significativos, tentando destacar seus pontos fortes e limites. .
